產(chǎn)品名稱：Elabscience小鼠生長分化因子15(GDF15)ELISA試劑盒(E-EL-M0604)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號：E-EL-M0604

產(chǎn)品品牌：Elabscience

產(chǎn)品用途：該試劑盒用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中GDF15濃度。

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。用抗小鼠 GDF15 抗體包被于酶標(biāo)板上， 實驗時樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）中的小鼠 GDF15 會與包被抗體結(jié)合。后依次加入生 物素化的抗小鼠 GDF15 抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，抗小鼠 GDF15 抗體與結(jié)合在包被抗體上的小鼠 GDF15 結(jié)合，生物素與親和素特異性結(jié)合而 形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過 氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長 處測 OD 值，GDF15 濃度與 OD450 值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出 樣品中 GDF15 的濃度。

注意事項：

試劑盒注意事項：

1) 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷。

2) 試驗中請穿著實驗服并戴乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時，請按國家生物試驗室安全防護條例執(zhí)行。

3) 剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。暫時不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按照上述表格中保存條件存放。

4) 請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液。未用完的濃縮生物素化抗體(100×)、濃縮HRP酶結(jié)合物(100×)、酶標(biāo)板及其他原液按照上述表格中保存條件存放。

5) 檢測使用的酶標(biāo)儀需要安裝能檢測450±2 nm波長的濾光片，光密度范圍在0-3.5之間。建議使用時提前15分鐘預(yù)熱。

6) 請勿使用其他批號或其他來源的試劑混合或替代本試劑盒中的試劑。

7) 試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用。

8) 請勿使用過期的試劑。n

樣品注意事項：

1) 收集血液的試管應(yīng)為一次性無內(nèi)毒素試管。避免使用溶血，高血脂樣品。

2) 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測可保存于2-8℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(3個月內(nèi)檢測)，避免反復(fù)凍融。在檢測前，冷凍過的樣本應(yīng)緩慢地融化并離心除去凍融過程產(chǎn)生的沉淀物。室溫混勻后使用。

3) 試劑盒檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍。如果樣品中待測物濃度過高或過低，請對樣本做適當(dāng)?shù)南♂尰驖饪s。

4) 若所檢樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預(yù)實驗驗證其檢測有效性。

5) 若使用化學(xué)裂解液制備組織勻漿或細(xì)胞提取液，由于引入某些化學(xué)物質(zhì)會導(dǎo)致ELISA測值出現(xiàn)偏差。

6) 某些重組蛋白可能與試劑盒中捕獲或檢測抗體不匹配而出現(xiàn)不能檢測的情況。

操作步驟：

1. 分別設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)孔加入 100 μL倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔加入 100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品&樣本稀釋液，其余孔加入 100 μL 待測樣本(建議所有的待檢樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在檢測中設(shè)立復(fù)孔；建議通過預(yù)實驗或咨詢技術(shù)支持確定待檢樣本的稀釋倍數(shù))。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育 90 分鐘。提示：加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，避免產(chǎn)生氣泡。加樣時間宜控制在 10 分鐘內(nèi)。

2. 甩盡孔內(nèi)液體，不用洗滌。每個孔中加入生物素化抗體工作液 100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育 1 小時。

3. 甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干。每孔加洗滌液 350 μL，浸泡 1 分鐘，吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，拍干。重復(fù)此洗板步驟 3 次。提示：此處與其他洗板步驟都可使用洗板機(參考北京拓普 DEM-3 型洗板機參數(shù)設(shè)置：2 點吸，每孔加入洗滌液 350 μL，振板 5 秒，吸液 0.5 秒)。洗板完成后請立即進行下步操作，不要讓微孔板干燥。

4. 每孔加 HRP 酶結(jié)合物工作液 100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育 30 分鐘。

5. 甩盡孔內(nèi)液體，洗板 5 次，方法同步驟 3。

6. 每孔加底物溶液(TMB)90 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分鐘左右。提示：根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(前 4 個顯色孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度)，即可終止。提前 15 分鐘打開酶標(biāo)儀預(yù)熱。

7. 每孔加終止液 50 μL，終止反應(yīng)。提示：終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

8. 立即用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長測量各孔的光密度(OD值)。

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